ADSC EXTRACTION KIT
ADSC( Adipose- derived-stem-cell) Extraction kit là bộ sản phẩm được chế tạo phục vụ cho tách chiết tế bào gốc từ mô mỡ. Bộ sản phẩm được sản xuất trên dây chuyền đạt tiêu chuẩn GMP-WHO, ISO:13485-2012
MỖI BỘ KÍT GỒM 04 CHAI
- 01 chai Washing Buffer1 (WB1)
- 01 chai Washing Buffer 2 (WB2)
- 01 chai Washing Buffer 3 (WB3)
- 01 chai Supper Extract (SE)
Các dạng đóng gói:
Tên sản phầm | Washing Buffer1 (ml) | Washing Buffer 2 (ml) | Washing Buffer 3 (ml) | Supper Extract (ml) | Công dụng |
ADSC Extraction Nano- kit | 30 | 30 | 30 | 1.0 | Tách tế bào từ 5-20g mỡ |
ADSC Extraction Micro-kit | 100 | 100 | 100 | 2.5 | Tách tế bào từ 20-50g mỡ |
ADSC Extraction Mini- kit | 100 | 100 | 100 | 3.0 | Tách tế bào từ 50-100g mỡ |
ADSC Extraction Mega- kit | 100 | 100 | 100 | 10 | Tách tế bào từ 100-200g mỡ |
QUY TRÌNH SỬ DỤNG BỘ KIT ADSC EXTRACTION – MICRO KIT
Bước 1: Xử lí sơ bộ mẫu
Cho toàn bộ mỡ (đến 50 gram) vào ống ly tâm.
Chú ý: Nếu mẫu là dạng khối mô mỡ nguyên (không phải dạng mỡ chọc hút) thì cần phải cắt nhuyễn mỡ bằng kéo hoặc dao vô trùng trước khi sử dụng bộ kit này.
Bước 2: Hút 20 mL dung dịch WB2 cho vào chai Super Extract 20, đậy nắp, lắc kĩ
Bước 3: Rửa mẫu bằng dung dịch rửa 1 (Washing buffer 1 – WB1)
– Cho 100 ml WB1 vào ống ly tâm nói trên, lắc đều. Ly tâm ở 1000g trong 5 phút, nhiệt độ phòng. Sau ly tâm loại bỏ dung dịch rửa, giữ lại mô mỡ
– Chú ý: Mô mỡ nổi ở pha trên, dung dịch rửa nằm pha dưới màu đỏ hồng. Để giảm lượng mỡ thất thoát, đặt pipette sâu xuống đáy ống để hút bỏ dung dịch rửa.
– Đối với hệ máy tính thời gian ngay sau khi máy chạy là 6 phút để đạt 1000g, còn đối với hệ máy tính thời gian sau khi đạt 1000g thì điều chỉnh 5 phút
Bước 4: Rửa mẫu bằng dung dịch rửa 2 (Washing buffer 2 – WB2)
– Cho 40 ml WB1 vào ống ly tâm nói trên, lắc đều. Ly tâm ở 1000 g trong 5 phút, nhiệt độ phòng. Sau ly tâm loại bỏ dung dịch rửa, giữ lại mô mỡ.
– Chú ý: Mô mỡ nổi ở pha trên, dung dịch rửa nằm pha dưới màu đỏ hồng. Để giảm lượng mỡ thất thoát, đặt pipette sâu xuống đáy ống để hút bỏ dung dịch rửa.
Bước 5: Phân tách mẫu
– Cho toàn bộ dung dịch Super Extract 20 vào ống ly tâm. Lắc đều, ủ ở 380C – 400C, từ 30 – 45 phút. Lắc đều sau mỗi 5 phút.
Bước 6: Thu nhận tế bào
– Bổ sung vào ống ly tâm dạng phễu 40 ml WB2; lắc kĩ (hoặc vortex). Ly tâm 3000g trong 10 phút, nhiệt độ phòng, loại bỏ dịch nổi và mô mỡ còn thừa, thu cặn tế bào.
– Chú ý: Cuối giai đoạn này, pha trên cùng có màu vàng óng là mỡ, tiếp đến là pha mô mỡ thừa, tiếp đến là pha dung dịch rửa, cuối cùng ở đáy ống ly tâm là tế bào quan tâm.
– Đối với hệ máy tính thời gian ngay sau khi máy chạy là 12 phút để đạt 3000g, còn đối với hệ máy tính thời gian sau khi đạt 3000g thì điều chỉnh 10 phút
Bước 7: Rửa tế bào bằng dung dịch rửa 3 (Washing buffer 3 – WB3)
– Bổ sung 50 mL dung dịch WB3 vào ống ly tâm nói trên; lắc kĩ. Ly tâm 3000g trong 10 phút. Loại bỏ dịch nổi, thu cặn tế bào. (Rửa tế bào lần 1)
– Bổ sung 50 mL dung dịch WB3 vào ống ly tâm nói trên; lắc kĩ. Ly tâm 3000g trong 10 phút. Loại bỏ dịch nổi, thu cặn tế bào. (Rửa tế bào lần 2)
KHẢ NĂNG PHÂN TÁCH CỦA ADSC EXTRACTION KIT
KHẢ NĂNG TÁCH CHIẾT | TỶ LỆ TẾ BÀO GỐC SAU PHÂN TÁCH | THỜI GIAN PHÂNTÁCH |
Lượng tế bào có nhân thu nhận được: từ 0,4 – 1,2.106 tế bào/ 1g mỡ. * | Lượng tế bào có nhân thu nhận được: từ 0,4 – 1,2.106 tế bào/ 1g mỡ. * | Từ 30- 60 phút cho 25-100g mỡ |
Tỷ lệ sống của tế bào sau phân tách từ 75-95%. ** | Có từ 5,62% – 10.21% tế bào gốc trong hỗn hợp tế bào sau phân tách |
* Số lượng tế bào được thu nhận phụ thuộc lớn vào chất lượng mô mỡ, vị trí thu nhận mô mỡ, phương pháp thu nhận mô mỡ và tuổi bệnh nhân.
** Tỷ lệ sống/ chết của tế bào phụ thuộc vào thiết bị đánh giá, thời gian lưu trữ mỡ, phương pháp thu nhận mỡ. Bộ kít được đánh giá bởi 3 phương pháp khác nhau, bao gồm: nhuộm với Trypan Blue và đếm trực tiếp dưới kính hiển vi thông qua buồng đếm hồng cồng; Đếm tế bào dựa vào nhân nhuôm PI (Nucleocounter), Đếm tế bào bằng thiết bị Flow Cytomtler nhộm với 7-AAD
Kết quả tế bào tách được
(Stromal Vascular Fraction- SVF) đã được nuôi trong môi trường DMEM/F12 bổ sung với 15 kháng sinh- nấm và 10% huyết thanh bò(FBS). Các tế bào được nuôi cấy ở 37oC với 5% CO2
Hãy là người đầu tiên nhận xét “BỘ KIT TÁCH TẾ BÀO GỐC TỪ MÔ MỠ”